TÉCNICA DETERMINACION DE HEMOGLOBINA

 Determina la concentración de hemoglobina en una muestra sanguínea mediante espectrofotometría por el método de Cianometahemoglobina.

La hemoglobina es una proteína conjugada de color rojo , componente principal de los eritrocitos en un 31- 34 % DE SU PESO MOLECULAR APROXIMADAMENTE DE 65000 y sirve de vehículo para el transporte de oxigeno Y CO2.
Una molécula de hemoglobina consta de dos pares de cadenas de polipeptidos y cuatro grupos protéticos (hem) que contiene cada uno un átomo de hierro ferroso . cada grupo hem se localiza exactamente en una determinada zona de una de las cadenas de polipeptidos.
Existen varios metodos para la determinacion de la hemoglobina , como son : la hematina acida , hematina alaclina , oxihemoglobina , carbixihemoglobina y cianometahemoglobina.
El metodo de cianometahemoglobina es de eleccion por las siguientes razones:

a) El método mide Hb metHb coHb ; mide SHb

b) La cianometahemoglobina es estable en soluciones divididas

c) Existe en el mercado a estándares certificados de cianometahemoglobina

d) Las lecturas se pueden hacer el espectrofotómetros de uso común .

La sangre se hemolisa por agregado de un agente tensoactivo . Con el ferrisianuro de potasio (K3Fe(CN)6) se oxida el atomo de Fe** a Fe*** para producir metahemoglobina . El KCN estabiliza la metahemoglobina como cianometahemoglobina . La coloración producida directamente proporcional a la concentración de hemoglobina presente.

Esta técnica para llevarla a cabo se necesita lo siguiente:

MATERIALES	REACTIVOS	APARATOS
Tubos de ensaye de 13x100mm	EDTA al 10%	Espectrofotómetro
Pipetas serológicas de 5ml	Reactivo de Drabkin
Pipeta de Sahli	Sangre venosa con anticuagulante
Gradilla
Gasa
celdas

 Espectrofotometro: Un espectrofotómetro es un instrumento usado en el análisis químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.

PROCEDIMIENTO

Con los materiales anteriores se realiza el procedimiento de la prueba siguiendo estos pasos:

1)colocar en un tubo de ensaye 5 ml de reactivo de Drabkin

2)mezclar perfectamente la sangre con el anticuagulante

3)llenar la pipeta de Sahli calibrada a 0.02 ml

4)limpiar la sangre adherida en el exterior de la pipeta y vaciar la sangre de la pipeta al liquido diluyente, enjuagando 3 veces la pipeta con el mismo liquido

5)mezclar perfectamente la sangre con el liquido

6)medir la extinción del problema contra la solución reactiva antes de 3 minutos a 540 nm.

VALORES NORMALES:

Altutud de residencia sobre el nivel del mar (m)	Criterios de exclusión o diferimiento
	Hombres	Mujeres
Entre 0 y 1500	<135g/l	<125g/l
1501 o mayor	<145g/l	<135g/l