DETERMINACIÓN DEL SISTEMA ABO (MÉTODO DIRECTO)

 Fundamento.

Para identificar los antígenos de los grupos sanguíneos del sistema ABO se utilizan anticuerpos específicos y su presencia se pone de manifiesto por la anticuagulacion de los eritrocitos.

La determinación puede hacerse en placas o en tubos sin embargo se recomienda en tubos , porque se facilita la observación de la reacción y con ello su interpretación.

MATERIAL BIOLOGICO	EQUIPO	RECTIVOS
Sangre sin anticuagulante 5ml	Centrifuga clínica	Suero hemotipificador Anti A
	Gradilla	Suero hemotipificador Anti B
	Tubos de ensayo de 10x75 o 12x75 mm	Suero hemotipificador Anti A,B
	Bulbos	Solución Isotónica de Cloruro de Sodio (NaCl) al 0.9%
	Pipeta Pasteur
	Marcadores
	Placa de vidrio o porcelana de 20x30 cm
	Aplicadores de madera

PROCEDIMIENTO

1)      Rotular los tubos con el umero de la muestra y la etiqueta Anti suero correspondiente.Ejemplo:

Muestra 1

Tubo No.1A será la muestra 1 con el reactivo Anti A

Tubo No.1B será la muestra 1 con el reactivo Anti B

Tubo No. 1AB será la muestra 1 con el reactivo Anti AB

Tubo No.1AT será la muestra 1 con su propio suero (autotestigo)

2)      Colocar con goteo correspondiente una gota de su suero hemotipificador (Anti A, Anti B, Anti AB) al tubo correspondiente , y dos gotas del suero de la muestra en estudio al tubo marcado AT

3)      Preparar una suspensión de eritrocitos al 5% lavado o sin lavar según se la situación. Eritrocitos sin lavar: del fondo del tubo que contiene el paquete globular se tomaran con una pipeta pasteur una gota , la cual se resuspendera con 19 gotas de Solucion salina agregar una gota de esta suspensión a cada uno de los tubos. Eritrocitos lavados:colocar 5 gotas de eritrocitos y llenar a la mitad del tubo don solución salina fisiológica(SSF) 0.9%, suspenda y centrifugue 1 minuto a 1000 rpm , tire el sobrenadante y repita la operación 3 veces, resuspende el botón en 19 gotas de SSF.

4)      Mezclar suavemente.

5)      Centrifugar los tubos 3400rpm 15 segundos o a 1000rpm 60 segundos.

INTERPRETACIÓN DE LAS AGLUTINACIONES OBSERVADAS:

Para la interpretación se deberá considerar el grado de aglutinación macroscópica de 0 a 4 cruces . Que se relaciona con la intensidad de aglutinación del paquete de eritrocitos  con el color del sobrenadante . Observar el tubo inmediatamente después de la centrifugación colocándolo de forma horizontal a la altura de los ojos y frente a una fuente de luz . El tubo se agitara suavemente desplazando la suspensión con el objeto de observar adecuadamente el grado de aglutinación.

No . cruces	Botón	Sobrenadante
4	Solido único	Claro
3	Un botón grande y varios pequeños o de 2 a 3 grumos grandes	Claro
2	Varios grumos medianos	Ligeramente rojo
1	Grumos pequeños con eritrocitos libres	Rojo
½	Escasos grumos muy pequeños como “arenilla”	Rojo
0	Nose observa	rosado