PRACTICA 3

DETERMINACION DEL SISTEMA ABO METODO INVERSO

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

FUNDAMENTO

·      La identificación de los anticuerpos naturales del Sistema ABO se realiza utilizando antígenos conocidos: eritrocitos A,B y O, que al ponerlos en contacto con el suero problema, se manifiesta por medio de aglutinación.

 

 

 

MATERIAL BIOLOGICO

·      Sangre sin anticoagulante 5ml.

 

 

REACTIVOS

Ø Suspensión al 5% de:

Ø Eritrocitos A

Ø Eritrocitos B

Ø Eritrocitos O

 

 

 

 

 

EQUIPO

·      Centrifuga Clinica

Una centrifugadora es una máquina que pone en rotación una muestra para –por fuerza centrífuga– acelerar la decantación o la sedimentación de sus componentes o fases (generalmente una sólida y una líquida), según su densidad. Existen diversos tipos, comúnmente para objetivos específicos.

 

 

 

 

·      Gradilla

Una gradilla es una herramienta que forma parte del material de laboratorio (principalmente en laboratorios de biología molecular, genética y química) y es utilizada para sostener y almacenar gran cantidad de tubos de ensayo o tubos eppendorf.

·      Tubo de ensayo de 10x75 o 12x75 mm.
El tubo de ensayo es parte del material de vidrio de un laboratorio de química. Consiste en un pequeño tubo cilíndrico de vidrio con un extremo abierto (que puede poseer una tapa) y el otro cerrado y redondeado, que se utiliza en los laboratorios para contener pequeñas muestras líquidas o sólidas, aunque pueden tener otras fases, como realizar reacciones químicas en pequeña escala. Entre ellos está el exponer a temperatura el mismo contenedor. Se guardan en un instrumento de laboratorio llamado gradilla. Los tubos de ensayo están disponibles en una multitud de tamaños, comúnmente de 1 a 2 cm de ancho y de 5 a 20 cm de largo.

 

 

·      Bulbos

Puede designar un recipiente en forma de ampolla, como en un termómetro

 

·      Pipeta Pasteur

La pipeta de Pasteur es similar a un utensilio de gotero, generalmente formada por un tubo de vidrio con borde cónico. Sirve para hacer la transferencia de pequeñas cantidades de líquidos. Creada por el químico francés Louis Pasteur, fue nombrada en su honor.

A diferencia de otras pipetas, esta no proporciona un volumen dado. Tiene sólo abertura inferior para la entrada de líquido. En su borde superior, tiene un "globo" que, cuando se pulsa expulsa el aire. El extremo inferior se sumerge en el líquido a ser transferido y luego soltar el frasco, el líquido es aspirado en la pipeta .

La pipeta de Pasteur se emplea cuando no se necesita una gran precisión al transferir el volumen del líquido.

 

 

 

·      Marcadores

·      Placa de vidrio o porcelana de 20x30cm.

·      Aplicadores de Madera.

TECNICA EN TUBO

1. Rotular los tubos con el numero de la muestra y la letra de los eritrocitos correspondientes.

2.Agregar dos gotas del suero del paciente (suero problema) a cada tubo.

3.Agregar una gota de Eritrocitos al 5% a cada tubo según corresponda

4.Centrifugar a 3500 rpm 15 segundos o a 1000 rpm a 60 segundos.

5.Observar microscópicamente las aglutinaciones e informa mediante cruces.r

GRADO DE AGLUTINACION

TUVO NO. 1
no. cruces------ 4
botón------- solido único
sobrenadante------claro

TUVO NO. 2
no. cruces-----3
botón------- un botón grande y varios pequeños o de 2 a 3 grumos grandes
sobrenadante------ claro

TUVO NO 3
no. cruces -------- 2
botón-------- varios grumos medianos
sobrenadante ------- ligeramente rojo

TUVO NO. 4
no. cruces ------- 1
botón------- grumos pequeños con eritrocitos libres
sobrenadante------- rojos

TUVO NO. 5
no. cruces ------- 1/2
botón-------- escasos grumos muy pequeños como "arenilla"
sobrenadate-------rojo

TUVO NO. 6

no. cruces -------- 0

botón-------- no se observa

sobrenadante-------- rosado

 

 

 

 

los tubos con el numero de la muestra y la letra de los Eritrocitos correspondientes

 

INTERPRETACION DE RESULTADOS

Aglutinación en grado de 0 a 4 cruces.

Eritrocitos A	Eritrocitos B	Eritrocitos O	Grupo
0	4	0	“ A”
4	0	0	“B”
0	0	0	“AB”
4	4	0	“O”

 

 

 

MEDIDAS DE SEGURIDAD Y CONTROL

ü Verificar que el material, los reactivos empleados y la suspensión de eritrocitos estén en perfectas condiciones y que la persona que efectúe la técnica sepa diferenciar la intensidad de la aglutinación.