Practica

 

INVESTIGACIÓN CON CÉLULAS CONTROL DE COOMBS EN LA PRUEBA CRUZADAS PRE TRANSFUSIONAL

 

TECNICA DE INVESTIGACIÓN CON CÉLULAS CONTROL DE COOMBS EN LA PRUEBA CRUZADA PRE TRANSFUSIONAL

                                       

OBJETIVO

·      Que el alumno aprenda a fijar un anticuerpo en la membrana del eritrocito. Al utilizar estos eritrocitos sensibilizados en las pruebas cruzadas que hayan resultado compatibles, convertirá una prueba negativa en positiva.

FUNDAMENTO

·      En esta prueba se fija sobre el determinante antigénico de eritrocitos O, anticuerpos (anti-D). estos eritrocitos al encontrarse en un medio con reactivo de coombs, este forma un puente entre los eritrocitos cercanos, produciendo aglutinación.

GENERALIDADES

·      Esta prueba fue descrita por primera vez en 1908 por Mc. Reschi y años más tarde en 1945 por coombs, Mourat y Race, aplicándola en la identificación de aglutininas Rh débiles e incompletas. El suero de coombs es una anti globulina humana, preparada por inmunización de animales (conejos o cabras a los que se les inyecta suero humano o las fricciones de este, los anticuerpos incompletos, entre ellos los que explican la eritroblastosis fetal y la anemia hemolítica adquirida, se adsorbe o se une al antígeno Rh fijos en la membrana del eritrocito, pero no los aglutinan, el suero anti globulina humana, permite reconocer estos globulos sensibilizados, al combinarse con los anticuerpos incompletos que ya cubren en la superficie con lo cual se produce la aglutinación.

·      Puesto que el suero humano contiene anticuerpos que pueden interferir en la prueba y pueden neutralizar el suero de coombs, es necesario eliminar totalmente el suero de la muestra sanguínea, mediante lavados repetidos con solución salina.

·      No se utilizan los sueros de sujeto A o B porque las substancias específicas de estos, tendrían de suero de coombs con anticuerpos contra las aglutinas a y b, los anticuerpos recubren con frecuencia los eritrocitos, pero no forman la malla necesaria que produce la aglutinación; como es el caso de anticuerpos dirigidos a los determinantes Rh sobre los eritrocitos humanos sin embargo la adicción de un antisuero anti globulina producido por una especie heteróloga, produce marcada aglutinación.

·      La prueba de anti globulina se usa principalmente para identificar cantidades sus aglutinantes o no aglutinantes de los anticuerpos anti eritrocitos.

 

MATERIALES Y EQUIPOS

Ø  1 gradilla

Ø   4 tubos de ensaye 10x75

Ø  2 pipetas pasteur c /bulbo

Ø  1 centrifuga serofuge

Ø  Baño María a 37°C

Ø  Suero de coombs

Ø  Solución salina en pizeta

Ø  Glóbulos rojos tipo O

 

 

·      TECNICA DE LA PRACTICA

 

1)       En un tubo de ensaye, se ponen dos gotas de globulos rojos O, cuatro gotas de solución salina y dos gotas de suero anti – D

2)       Se incuba el tubo a 37°C durante 30 min.

3)       Lavar en tres ocasiones con solución salina a 3400 rpm, durante 15 seg en cada ocasión

4)       Para provocar que los eritrocitos se encuentran sensibilizados, se toma una gota de la mezcla en otro tubo y se le agrega una gota del reactivo de coombs, se centrifuga a 3400 y si se aglutinan, están listos para usarse

5)       Se agrega una gota de los globulos rojos O sensibilizados a cada uno de los tubos en que se realizó el coombs en las pruebas cruzadas

6)       Se centrifugan y se observa si existe aglutinación

 

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

v  Si las pruebas cruzadas resultaron compatibles y estuvieron correctamente realizadas, al agregar las células control de coombs se observara aglutinación.

a)       EN CASO DE NO ENCONTRAR AGLUTINACION, SE PROCEDERA A REPARTIR TODAS LAS PRUEBAS CRUZADAS, PUES EXISTIÓ UN ERROR EN LA MANIPULACIÓN O EN LA AGRUPACIÓN SANGUINEA