Practica

 

PRUEBAS CRUZADAS

 

 

 

TECNICA DE PRUEBAS CRUZADAS

                                       

FUNDAMENTO

·      El objetivo de las pruebas cruzadas de compatibilidad, es investigar anticuerpos específicos activos a 37°C en el suero del paciente contra los eritrositos del donador y viceversa.

·      Las pruebas cruzadas se dividen en tres partes:

1.   Prueba mayor: que contiene el suero del paciente y eritrocitos de donado (D)

2.   Prueba menor : que contiene el suero del donador y los eritrocitos del paciente (R)

3.   El auto testigo: que contiene el suero y eritrocitos del paciente (AT)

 

 

MATERIALES

Ø  Tubos de 13X100mm

Ø   tubos de ensaye

Ø  Solucion Salina Isotonica (0.9)

Ø  Suero antiglobulina humana (AGH, suero de coombs)

Ø  Albumina bovina al 22%

Ø  Baño maria para incubación a 37°C

 

MATERIAL BIOLÓGICO

Ø SANGRE DEL DONADOR

ü Todas las bolsas de sangre para transfusión, llevan segmentos de tubos de plástico (pilotos) de la sangre que esta en la bolsa,(sangre anticoagulada con ACD ó CPDA)

Ø SANGRE DEL RECEPTOR

ü De 5 a 10 ml de sangre fresca sin anticuagulante en tubo rotulado con nombre completo del enfermo, fecha, edad, pabellón, cama, y hora de extracción.

PROCEDIMIENTO

·      PRUEBAS CRUZADAS

 

1)       Centrifugar el tubo del receptor 5 min a 3500 rpm, para separar completamente el suero de los eritrocitos del coagulo.

2)       Deben de anotarse los datos completos del paciente en la hoja de reporte y anotar sus resultados como se indicara más adelante y separar el suero en un tubo rotulado con los datos del paciente como se indico anteriormente

3)       Cortar un segmento del tubo piloto de la bolsa de sangre, pasar todo el contenido de 12x75mm, y centrifugar a 3500rpm durante 3 min, este tubo contiene plasma y eritrocitos del donador.

4)       Colocar de 2 a 3 gotas de sangre remanente del tubo piloto en otro tubo de 12X75 mm y adicionar la solución salina.

5)       Realizar tres lavados po un tiempo de tres min a 300rpm. Decantando y volviendo a centrifugar

6)       Despues de los lavados, hacer una solución de eritrocitos al 5% con solución salina (este tubo contiene eritrocitos “lavados” de la sangre del donador)

7)       Colocar una gradilla 3 tubos previamente rotulados 10x75mm

8)       Con una pipeta pasteur colocar 2 gotas de suero del paciente. En tubo de prueba mayor (D), una gota de eritrocitos del paciente en el tubo de pruba menor ( R)

9)       Colocar con una pipeta en el tubo del autotestigo (T), dos gotas de suero del paciente y una gota de eritrocitos del mismo paciente

10)   Mezclar perfectamente el contenido de los tubos. Centrifugar durante 30 seg a 3400 rpm

11)   Leer y reportar en la hoja de anotaciones (SR) salina rápida.

 

v  Si en algunos de los tubos (D. R. A. T.) se observa hemolisis o aglutinación, debe rectificarse de inmediato el grupo sanguíneo, tanto del donador como del receptor

1)       Si las lecturas son negativas, continuar con el procedimiento e incubar los tubos durante 37°C a baño maria durante una hora (checar la temperatura de 5 a 10 min )

2)       Una vez terminada la incubación, centrifugar rápidamente todos los tubos durante 30 seg a 3400rpm

3)       Leer y reportar los resultados en la hoja de reporte BS-7,BS-5,(PRUEBAS CRUZADAS)

4)       Si se observa aglutinación o hemolisis, la prueba es incompatible , si el resultado es negativo:

5)       Lavar los tubos tres veces con solución salina: decantando y secando despues de cada centrifugación  3 min a 3400rpm

6)       Resuspender suavemente el botón (agitando el tubo)

7)       Agregar a cada tubo, 1 gota de suero de coombs (AGH), mezclar y centrifugar durante 30 seg. a 3400 rpm

8)       Leer los resultados y anotarlo en la hoja de reporte (S/C)

9)       SI SE OBSERVA AGLUTINACION LA PRUEBA ES INCOMPATIBLE, SI ES NEGATIVA

10)   Adicionar 1 gota de células sansibilizadas, centrifugar durante 30 seg a 3400 rpm

11)   Leer y reportar en la hoja de reportes (CONS)