Practica

 

PRUEBA DE COOMBS

 

 

 

TECNICA DE PRUEBA DE COOMBS

                                       

OBJETIVO

·      El alumno conocerá los eritrocitos sensibilizados  por anticuerpos incompletos, que son capaces de ser aglutinados por la anti globulina humana.

 

GENERALIDADES

·      El suero de coombs permite establecer la presencia de globulina y por lo tanto de anticuerpos, ya que son de la misma naturaleza. Los anticuerpos incompletos como son los que producen la eritroblastosis fetal y la anemia hemolítica adquirida, se observen sobre la superficie del glóbulo rojo; pero no los aglutinan el suero anti globulina permite reconocer estos globulos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulínicos que ya cubren. Es útil reconocer estos globulos sensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulínicos que ya cubren su superficie el suero de coombs es ideal pues tiene anticuerpos contra las globulinas séricas humanas que abarcan 4 grandes alfa 1, alfa 2, beta y gamma, dentro de estos grupos se encuentran anticuerpos anti Rh incompletos, anti-duffi, anti kell el suero de coombs se obtiene por inyecciones repetidas de sueros humanos del grupo O a conejos el animal sensibilizado de esta manera produce anticuerpos contra la fracción globulínica  de las proteínas séricas y contra anticuerpos incompletos que pueden encontrarse revistiendo a los hematises o bien es suspensión en el plasma, por lo que se llama antiglobulinas humana, se preparan reactivos de amplio espectro mediante la mezcla de sueros obtenidos de distintos animales

·      La IgG no produce aglutinación de los eritrocitos, pero se fijan sobre ellos y permanecen sin soltarse, al agregar el suero de coombs se forman puentes entre los fragmentos cercanos y es posible ver la aglutinación, revelando que esos eritrocitos estaban en realidad cubiertos de anticuerpos.

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA

·      FUNDAMENTO: La prueba directa se realiza cuando el anticuerpo se ha fijado sobre el eritrocito “in vivo”, permite establecer la sensibilización de los globulos rojos que tuvo lugar en el organismo. Se usan para el diagnóstico de eritroblastosis fetal, anemia hemolítica y reacciones hemolíticas postrasfucionales por sangre incompatible

MATERIAL Y EQUIPO

Ø  1 gradilla

Ø  4 tubos de ensaye 13 x100

Ø  2 tubos de 10x 75

Ø  2 pipetas pasteur c/bulbo

Ø  1 centrifuga serofuge

Ø  1 baño maria 37°C

Ø  Solución salina en pizeta

Ø  Suero de coombs

Ø  Glóbulos rojos problema

Ø  Glóbulos rojos O Rh negativo

 

 

·      TECNICA  COOMBS DIRECTA

·      Para identificar  los glóbulos rojos sensibilizados es necesario remover la totalidad del suero de los eritrocitos, mediante lavadas repetidas con suero salina. Este proceso es importante, pues si se dejan residuos proteicos se neutraliza el suero de coombs y se obtendrán falsos negativos.

 

1)       Se prepara una suspensión de glóbulos rojos al  5 % de la cual se colocan dos gotas en un tubo de ensaye y se produce al lavado por tres ocasiones

2)       Después del ultimo lavado se re suspenden los glóbulos rojos nuevamente con una gota de solución salina, agregar dos gotas de suero de coombs  y mezclar.

3)       Incubar por 30 min a 37°C, extraer el tubo cuidadosamente y observar si existe aglutinación en el fondo del tubo con leves movimientos de inclinación

4)       Se aconseja como testigo utilizar hematíes de adulto no sensibilizados del mismo grupo del paciente. el testigo se prepara en un tubo poniendo una gota de sangre O Rh, incubar media hora, lavar por tres veces estos glóbulos y después se adiciona una gota de suero de coombs.

 

v  INTERPRETACION DE RESULTADOS

a)       SI EL TUBO PROBLEMA PRESENTA AGLUTINACION, LOS GLOBULOS ROJOS ESTAN SENSIBILIZADOS POR ALGUN ANTICUERPO INCOMPLETO.

PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA

FUNDAMENTO:

·      En esta prueba la sensibilización se realiza in vitro, en la primera etapa se sensibilizan los glóbulos rojos testigos con el anticuerpo que se desea investigar (Rh negativo, factor kell, diego, etc.) y en la segunda etapa por medio de reactivo de coombs se hace visible la sensibilización por medio del fenómeno de aglutinación macroscópica

TECNICA

 

1)       En tubo poner cuatro gotas del suero problema y una gota de globulos rojos sensibilizados, suspendidos en solución salina al 5%, si se investigan anticuerpos Rh se usan glóbulos rojos tipo O Rh positivos

2)       Se incuban a 37°C por una hora, se centrifuga el tubo a baja velocidad 2500rpm x 1 min

3)       Se lavan los glóbulos rojos sensibilizados tres veces con solución salina desechando el  sobrenadante completamente en el último lavado, dejando solo el botón de eritrocitos en el fondo

4)       Agregar dos gotas de suero de coombs, mezclar perfectamente y poner en baño maría a 37°C, durante 5 min

5)       Centrifugar a velocidad 2500 rpm y buscar aglutinación en el fondo del tubo

 

v  INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

b)      SI SE ENCONTRO AGLUTINACION DESPUES DEL PASO 2. INDICAR LA PRESENCIA DE AGLUTINAS ANTI Rh EL SUERO PROBLEMA.

c)       SI LA PRUEBA ES NEGATIVA. SE PUEDE PRESUMIR  LA EXISTENCIA DE ANTICUERPOS INCOMPLETOS O BLOQUEADORES, Y SE COMPRUEBA PROSIGUIENDO CON LA TECNICA

d)      SE PUEDE REALIZAR DILUCIONES DEL SUERO PROBLEMA PARA CONOCER EL TITULO DE AGLUTININAS ANTI- Rh QUE EXISTEN EN EL PACIENTE.