Practica

 

Prueba de la variante Du

 

 

TECNICA DE PRUEBA DE LA VARIANTE Du

                                       

INTRODUCCIÓN

·      En algunas ocasiones, los anticuerpos unidos a los antígenos correspondientes presentes en las membranas de los eritrocitos no dan lugar a la formación de un aglutinado visible.

·      Coombs diseño un método para poner en evidencias la presencia de estos anticuerpos no aglutinantes mediante la edición al sistema de un anticuerpo anti- inmunoglobulinas humanas preparando en otra especie ( generalmente conejos) se conoce como suero de coombs.

·      La experiencia a demostrado que esta prueba es indispensable para demostrar la presencia anticuerpo Rh, ya que la adición de anti suero antiglobulinas porducida en especie heterologa ( por ejemplo gamma globulina de conejo anti humano) produce una clara aglutinación. Asi la prueba de antiglobulina o prueba de coombs se utiliza principalmente para detectar cantidades subaglutinantes o no aglutinantes de anticuerpos anti eritrocitos. Sin embargo, también puede emplear reactivos de coombs mas específicos dirigidos a clases de inmunoglobulinas, por ejemplo anti- igG  anti- igA o anticadenas L, para detectar inmunoglobulinas unidas a células.

 

FUNDAMENTO

·      Los eritrocitos clasificados como Du poseen el antígeno D pero esta expresado débilmente, por ello no aglutinan directamente con la mayoría de los sueros anti- Rh (D) sin embargo es reconocido con la antiglobulina humana ( suero de coombs).

 

MATERIAL BIOLOGICO

Ø  Tubos marcados con Rh negativo

 

REACTIVOS

Ø Antiglobulina humana ( suero de coombs)

Ø Eritrocitos sencibilizados

Ø Soluciones isotónicas de NaCL al 0.9% (SSF)

 

 

PROCEDIMIENTO

·      PRUEBA DE LA VARIABLE Du

 

 

1.       Incubar el tubo (el que dio negativo en el Rh en la determinación de D) a 37°C de 15 a 60 minutos.

2.       Lavar los eritrocitos de la siguiente manera.

3.       Agregar 3 gotas de SSF y agitar  suavemente para re suspender los eritrocitos, posteriormente llenar 2/3 partes del tubo con SSF procurando que quede una suspensión homogénea

4.       Centrifugar a 3400 rpm 3 min y decantar

5.       Repartir 3 veces el paso anterior. al termino del ultimo lavado, decantar perfectamente la solución salina

6.       Invertir el tubo y secar el borde con una gasa

7.       Agregar 2 gotas de sueros de coombs y mezclar nuevamente

8.       Centrifugar a 3400 rpm durante 15 segundos o a 1000 rpm 1 min.

9.       Re suspender suavemente el botón de eritrocitos del fondo del tubo y observar microscópicamente la aglutinación y anotar el resultado en número de cruces, ver tabla.

 

GRADO DE AGLUTINACIÓN

1)       TUBO NO. 1

NO DE CRUCES……4

BOTON………… SOLIDO UNICO

SOBRENADANTE……….. CLARO

 

2)       TUBO NO. 2

NO DE CRUCES……3

BOTON………… UN BOTON GRANDE Y VARIOS PEQUEÑOS DE 2 A 3 GRUMOS GRANDES.

SOBRENADANTE……….. CLARO

 

3)       TUBO NO. 3

NO DE CRUCES……2

BOTON  ………… VARIOS GRUMOS MEDIANOS

SOBRENADANTE……….. LIGERAMENTE ROJO

 

4)       TUBO NO. 4

NO DE CRUCES……1

BOTON………… GRUMOS PEQUEÑOS CON ERITROSITOS LIBRES

SOBRENADANTE……….. ROJO

 

5)       TUBO NO. 5

NO DE CRUCES……1/2

BOTON………… ESCASOS GRUMOS MUY PEQUEÑOS COMO ARENILLA

SOBRENADANTE……….. ROJO

 

6)       TUBO NO. 6

NO DE CRUCES……0

BOTON………… NO SE OBSERVA

SOBRENADANTE……….. ROSADO